换一批摘要人X型磷脂酶A2在大肠杆菌中的表达产物完全以不溶的包涵体形式存在.用以前适用于人胰型(IB型)磷脂酶A2的稀释重折叠方法,并不能使它有效重折叠.以初步纯化的包涵体为对象,发现溶液的温度、pH值和蛋白质浓度对X型磷脂酶A2体外重折叠有很大的影响.研究了一些小分子化合物对X型磷脂酶A2,在高蛋白质浓度(1 g/L)下重折叠的影响,发现1 mo1/L的L-精氨酸能提高其重折叠效率达6倍多.L-精氨酸的结构类似物L-瓜氨酸对X型磷脂酶A2的重折叠有较弱的改善,而L-赖氨酸和L-精氨酸甲基酯则降低了X型磷脂酶A2的活性恢复.结果表明,L-精氨酸对蛋白质重折叠的帮助作用,可能是通过精氨酸与折叠中间物的结合产生的,精氨酸的胍基和羧基都是必需的,其侧链胍基以其特殊的带电方式阻遏了重折叠过程中的积聚和分子间二硫键形成的反应.
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