换一批禽副粘病毒-2膜融合相关多肽基因的构建与表达
Construction and Expression of Correlative Genes With Membrane Fusion of Avian Paramyxovirus-2
摘要囊膜病毒与宿主细胞的膜融合是病毒入侵宿主细胞的第一步.禽副粘病毒-2(APMV-2)囊膜表面糖蛋白有2种,与宿主受体结合的血凝素神经氨酸酶(HN)及介导膜融合的融合糖蛋白(F).HN蛋白的茎部区域(stalk region)与球状头部区域(globularhead region),以及F蛋白的3段七肽重复区域(heptad repeat,HR)都可能与膜融合直接相关,将5段多肽进行基因的构建与表达研究.根据已发表的禽副粘病毒-1(APMV-1)氨基酸序列,应用BLAST程序进行同源性分析,以确定APMV-2相应区域,使用搭桥PCR或普通PCR方法构建基因,分别克隆入表达载体pGEX-6p-I获得重组质粒,阳性重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),表达后获得可溶性融合蛋白,3C蛋白酶酶切后的蛋白质混合物经Glutathione-Sepharose 4B亲和层析纯化,最终获得可溶性、高纯度的5段多肽.应用LeamCoil-VMF软件与ExPASy系列软件对蛋白质结构与功能进行预测与分析.分子筛实验结果表明,F蛋白的HRI与HR2可形成六聚体结构,圆二色谱实验结果则表明,六聚体蛋白富含α螺旋结构.
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DOI
10.3321/j.issn:1000-3282.2005.03.007
发布时间
2005-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30228025）
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