噬菌体展示protein A及protein L Ig结合单结构域随机组合文库及Ig亲和筛选

Phage Display of Random Combinatorial Libraries of Ig-binding Mono-domains of Protein A and Protein L and Ig Affinity Screening

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摘要Protein A和protein L是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含Sac Ⅰ位点的特定引物PCR分别扩增制备protein A的A、B、C、D抗体结合结构域和protein L的B3抗体结合结构域,各结构域DNA片段经Sac Ⅰ酶切后,再随机连接形成各种不同长度的分子组合文库,将该文库呈现在噬菌体表面构建了噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库,所建组合文库容量为2.3×106个菌落形成单位,滴度为4.1×1011 TU/ml,包含各种单结构域片段,并以随机方式连接.用人Ig对该文库进行4轮亲和筛选,随机挑选36个代表性的阳性克隆进行序列测定分析表明,亲和筛选获得了多种非天然形式存在的新的Ig结合分子结构,其中32个克隆具有由protein L的单结构域和protein A的单结构域间隔重复排列而成的特征性(MDPL-MDPA)n结构.对噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库的体外分子进化研究的尝试,为Ig结合分子的结构和功能研究提供了一新的途径,也为Ig结合分子的定向改造打下基础.