换一批用于库-库筛选体系的抗原表达载体的构建
Construction of The Antigen Expression Vector Used for Library-library Screening
摘要选择感染性噬菌体(SIP)技术是研究蛋白质相互作用的良好手段,体内SIP技术在理论上适于库-库筛选,而双载体共包装聚合噬菌体方式是一条有效途径.为构建适合库-库筛选的抗原表达载体,选用TG10载体作为基本载体进行改造,首先克隆噬菌体M13基因间隔区的序列插入TG10中得到质粒pTMI,克隆基因Ⅲ的N1N2区序列,并在其3'端加上一段G4T柔性多肽,将NIN2插入到pTMI载体中Lac启动子的下游得到pTMIN,化学合成Ptrc启动子序列替换pTMIN中的Lac启动子及部分功能基因序列,构建成抗原表达载体pTTMIN,化学合成c-myc的十肽表位插入到G4S后进行融合表达,采用ELISA和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测抗原的表达,结果显示抗原得到了融合表达.用抗体呈现载体对pTTMIN性能进行鉴定,结果表明抗原表达载体可以与抗体呈现载体高效的共包装.综合以上结果说明抗原表达载体构建成功,可望用于库-库筛选体系.
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分类号
Q7（分子生物学）
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1000-3282.2006.03.012
发布时间
2006-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
中国科学院项目（非规范项目）（30200156）
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