换一批一种嗜热耐酸古细菌JP2菌株编码的热稳定DNA连接酶的生物化学及酶学特性研究
Biochemical and Enzymatic Characterization of a Thermostable DNA Ligase Encoded by Thermophilic Acidophilic Archaebacterium Strain JP2
摘要对分离自巴布亚新几内亚地热活跃区的一种嗜热耐酸古细菌--JP2菌株中的DNA连接酶基因进行了克隆、表达、纯化,并对其生物化学及酶学特性进行了研究.对其核酸及氨基酸序列的分析表明:JP2菌株的DNA连接酶与古细菌种Sulfolobus solfataricus和Sulfolobus shibatae的DNA连接酶具有很高的同源性,尤其在与功能紧密相关的6个保守结构基序的一致性更高.JP2连接酶表现出高的DNA缺口连接活性,在二价金属辅因子的选择方面,JP2连接酶更倾向于Mn2+离子而不是Mg2+、Ca2+及其他离子.不同温度时的热稳定性测试显示:JP2连接酶在50～80℃时为较适连接温度,当温度不超过85℃时,连接酶的活性在5 h内保持相对稳定,但在90℃以上活性则很快降低.还分离纯化了JP2的分子伴侣--TF55,并将其应用于增加JP2连接酶的热稳定性研究.结果表明:在体外85℃时,分子伴侣未增加连接酶的热稳定性,可能的原因是在85℃体外状态下TF55本身就表现出不稳定性.
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关键词
DNA连接酶Sulfolobusspp嗜热耐酸古细菌耐热性分子伴侣TF55DNA ligaseSulfolobus spp.thermophilic acidophilic archaebacteriumthermotolerancemolecular chaperone TF55
分类号
Q78
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1000-3282.2006.09.012
发布时间
2006-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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