换一批非洲爪蟾PAPC多克隆抗体的制备及其特异性鉴定
Preparation and Characterization of Polyclonal Antibody Against Xenopus PAPC
摘要非洲爪蟾Paraxial Protocadherin(PAPC)是一个在爪蟾Spemann组织者特异表达的膜蛋白.它在爪蟾原肠运动阶段的汇聚延伸运动和体节发生阶段的体节边界形成,以及早期听泡的形态发生和细胞特化过程中都有重要的作用.为了研究PAPC基因在早期胚胎发育过程中的表达及其生物学功能,需要制备PAPC抗体.应用谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S transferase,GST)表达系统表达GST-PAPC融合蛋白,亲和纯化后用以免疫新西兰大白兔,获得PAPC多克隆抗体.免疫印迹分析发现,以1∶3000稀释的该多克隆抗体为一抗时,能够在转染了全长PAPC质粒的HEK293T细胞的蛋白质抽提物中,特异地识别出150 ku的印迹条带.同时,GST-PAPC融合蛋白可以竞争性抑制该抗体对全长PAPC质粒转染细胞的蛋白质抽提物的特异性条带.用1∶500稀释的该抗体为一抗进行免疫荧光分析时,发现,PAPC多克隆抗体能够识别在HEK293T细胞中过表达以及爪蟾动物极细胞中过表达的PAPC蛋白,荧光信号定位在细胞膜上.免疫印迹分析证明,PAPC抗体能够识别爪蟾胚胎中内源表达的PAPC蛋白.
更多相关知识
关键词
非洲爪蟾Paraxial Protocadherin(PAPC)原核表达多克隆抗体免疫印迹免疫荧光Xenopus laevisParaxial Protocadherin (PAPC)prokaryotic expressionpolyclonal antibodyWestern blottingimmunofluorescent staining
分类号
Q78
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1000-3282.2007.02.016
发布时间
2007-03-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30500276）
- 浏览336
- 被引5
- 下载14
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
