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敲除山羊胎儿成纤维细胞中的抗体重链基因

Knockout of The Gene Encoding Immunoglobulin-mu in Goat Fetal Fibroblasts

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学术成果认领

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摘要在针对大动物的精确基因修饰研究中,基于体细胞的同源重组是唯一可行与有效的方法.其中,沉默基因位点的重组尤为困难.为获得抗体基因功能缺失的山羊用于人源化抗体的研究,通过体细胞同源重组技术,首次成功地获得了抗体基因敲除的山羊胎儿成纤维细胞株,该细胞株可用于体细胞克隆制备抗体基因功能缺失的转基因山羊.以35日龄的山羊胎儿成纤维细胞(GEF88)基因组DNA为模板,扩增山羊抗体重链J-Cμ基因作为同源臂,构建了同基因型的正负筛选打靶载体GTIgH.将此打靶载体经电穿孔的方法转染GEF88细胞,并通过0.8 mg/L的嘌呤霉素进行药物筛选,获得了362个抗性细胞克隆,PCR、测序及DNA印迹鉴定结果显示,其中的GT211抗性细胞克隆为中靶细胞,该细胞克隆中的抗体重链基因的一条等位基因已被成功敲除.

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作者李蓓 ^[1] 俞慧清 ^[2] 朱采红 ^[1] 谢发展 ^[1] 陈建泉 ^[2] 成国祥 ^[3] 学术成果认领

作者单位同济大学生命科学与技术学院,上海,200092 ^[1] 上海转基因研究中心,上海,201210 ^[2] 同济大学生命科学与技术学院,上海,200092;上海转基因研究中心,上海,201210 ^[3]

关键词基因敲除体细胞基因打靶山羊胎儿成纤维细胞抗体重链基因(IgH)沉默基因

主题词基因(Genes)抗体(Antibodies)山羊(Goats)细胞(Cells)胎儿(Fetus)

分类号 S8

栏目名称 研究报告

DOI 10.3321/j.issn:1000-3282.2008.08.007

发布时间 2008-10-30

基金项目

上海市科委资助项目

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生物化学与生物物理进展

2008年35卷8期

899-904页

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