换一批凝集素芯片技术检测糖蛋白方法的建立及初步应用
Establishment of a lectin microarray Method for The Rapid Analysis of glycoprotein and Its Application*
摘要建立了凝集素芯片技术检测糖蛋白的方法,对实验条件进行了优化,应川凝集素芯片初步检测分析了Chang's liver止常肝细胞总蛋白中的糖蛋白糖链构成.将凝集素ConA、GNA固定于环氧化修饰的玻片表面,用Cy3标记标准糖蛋白RNaseB,利用凝集素识别特异糖链的原理建立凝集素芯片检测糖蛋白的方法.摸索出最佳封闭剂是含1%BSA的磷酸缓冲液,最佳孵育时间及温度为3 h和审温,最佳孵育缓冲液为含1%BsA和0.05%Tween-20的磷酸缓冲液,并用甘露糖抑制实验验证了凝集素芯片结合的特异性.用包含10种凝集素的芯片,成功解析了标准糖蛋白RNaseB、Fetuin的糖链构成,证实了凝集素芯片检测糖蛋白糖链的可行性.最后用凝集素芯片初步检测分析了cllang's livet正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白糖链构成,发现Cllang's livet 正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白可能有多价Sia或GlcNAc、terminald-l,3 mannose、GalNAc、GalB-1,4G1cNAc这些糖链结构的存在.蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,它在微生物感染、细胞分化、肿瘤转移、细胞癌变等牛命活动中起着重要作用,因此近年来蛋白质的糖基化研究受到广泛的重视,但由于缺乏一种简便、快速、高通量的检测于段,蛋白质糖基化修饰的研究发展缓慢.凝集素芯片技术的出现实现了对糖蛋白的快速、准确、高通量的榆测分析.
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分类号
Q5-3（生物化学研究法）
栏目名称
DOI
10.3724/SP.J.1206.2008.00382
发布时间
2009-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家高技术研究发展计划(863)资助项目（(2007AA022413)）
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