换一批大鼠N型钙通道ⅢP区原核表达、纯化及活性研究
Expression and Purification of The Third P Region of α1B Subunit of N-type Calcium Channel of Rattus norvegicus
摘要高保真PCR克隆出编码大鼠海马组织N型钙通道α1B亚基ⅢP区的DNA序列,分别与表达载体pET28b和pGEX-4T-1连接,转化入能补充稀有密码子tRNAs的大肠杆菌Rosetta菌株中,通过优化表达条件,实现了高效诱导表达.再通过低温诱导,将包涵体用尿素溶解再稀释后透析法复性、酶切、亲和柱层析等方法得到较纯的可溶性目的蛋白HIS-Cav22P、GST-Cav22P和Cav22P,紫外吸收光谱检测实验证明了重组蛋白HIS-Cav22P能和钙离子可逆地结合.最后通过GST沉降实验证明了芋螺毒素SO3与Cav22P存在体外相瓦结合作用.上述结果为揭示芋螺毒素SO3特异性阻断大鼠海马组织N型钙流的分子机制提供了直接的依据,也为建立筛选新的非吗啡型天然镇痛药物的技术平台提供了基础.
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10.3724/SP.J.1206.2009.00351
发布时间
2010-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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