换一批靶向增殖细胞核抗原shRNA的构建及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响
Construction of shRNA Targeting PCNA Gene and Its Effects on Proliferation and Apoptosis of HepG2 Cell Lines
摘要为了探讨抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,将前期筛选出的最佳siRNA序列转化为能表达其小发夹结构RNA(small hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencex2.0-U6质粒定向连接,构建靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,经DNA测序证实与设计完全一致.随后采用WST法及克隆形成抑制观察细胞增殖抑制情况、划痕实验来观察细胞迁移能力,流式细胞术、Hoechest 33258染色、细胞线粒体膜电位改变检测细胞凋亡.在转染HepG2细胞48 h后,pShPCNA组细胞PCNA mRNA表达明显下调,并出现明显的增殖抑制作用,明显抑制细胞克隆的形成和细胞的迁移力,且呈剂量-效应关系.流式细胞术检测发现:pShPCNA组细胞明显阻滞于G0/G1期,并出现明显的亚二倍体凋亡峰,出现明显的早期凋亡细胞群.荧光显微镜检测表明,细胞线粒体膜电位降低,并且细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学变化.上述结果表明,成功构建了靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,pShPCNA转染HepG2细胞48 h后,能够显著抑制细胞的生长增殖、诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞于G0/G1期.
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关键词
RNA干扰增殖细胞核抗原真核细胞表达载体HepG2细胞肝癌RNA interferenceproliferating cell nuclear antigeneukaryotic expression vectorHepG2 cell linehepatocelluar carcinoma
医学主题词
细胞(Cells)增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen)细胞增殖(Cell Proliferation)肝肿瘤(Liver Neoplasms)真核细胞(Eukaryotic Cells)
栏目名称
DOI
10.3724/SP.J.1206.2009.00573
发布时间
2010-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广东省科技计划（2009B080701051）
广东省医学科学技术研究项目（A2007322）
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