换一批Dvl2-DIX结构域的SiteⅢ相关突变体结晶及其与Ccd1-DIX的共结晶
Crystallization of Mutations at Site Ⅲ of Dvl2-DIX and Co-crystallization of Dvl2-DIX(G65A) With Ccd1-DIX
摘要Dvl(Dishevelled)是Wnt信号通路传递的核心分子,无论内源的还是过表达的Dvl在细胞体内都能因自聚而形成puncta.研究已报道,Dvl主要通过其DIX结构域上的三个作用区域来介导自聚:SiteⅠ、SiteⅡ和SiteⅢ,其中SiteⅠ和SiteⅡ还参与了DvI-DIX与Ccd1-DIX的异聚.为了进一步得到Dvl2-DIX上SiteⅠ和SiteⅡ的直接三维结构,本研究设计了一系列的SiteⅢ突变体.通过体内和体外实验进一步证实了这些突变氨基酸确实参与了Dvl2-DIX的自聚,然后对这些SiteⅢ突变体蛋白成功地进行了纯化和结晶,最终得到3.1(A)的Dvl2-DIX(G65A)晶体数据.分析表明该晶体存在片层位移现象,需对数据进行一定修正后才能进行后续的结构分析.体外实验又证实了这些突变氨基酸不影响Dvl2-DIX与Ccd1-DIX的异聚,为了进一步研究Dvl2-DIX与Ccd1-DIX相互作用,我们对这些SiteⅢ突变体蛋白与Ced1-DIX进行共结晶.最终获得Dvl2-DIX (G65A)与Ccd1-DIX复合物的初晶,利于进一步的晶体优化及数据收集.
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分类号
Q71（生物大分子的结构和功能）
栏目名称
DOI
10.3724/SP.J.1206.2012.00216
发布时间
2012-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31070643）
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