换一批酵母双杂交检测C17orf25蛋白与ADP-核糖焦磷酸水解酶NUDT9的相互作用
Interaction of C17orf25 with ADP-ribose Pyrophosphatase NUDT9 Detected via Yeast Two-hybrid Method
摘要通过RACE PCR的方法从肝组织中分离得到C17orf25基因. 利用酵母双杂交的方法以C17orf25为结合结构域筛选人HeLa cDNA文库分离得到nudt9基因. NUDT9是一种焦磷酸酶, 可以将ADP-核糖水解成AMP和核糖-5-磷酸. 在大肠杆菌中直接表达了C17orf25蛋白、 6×His-tag与NUDT9的融合蛋白质, 两者均以包涵体形式存在. 蛋白质条带割胶纯化, 并复性. 之后的NTA-Ni2+亲和柱层析实验表明这两种蛋白质在体外相互作用. 将C17orf25与绿色荧光蛋白基因在SMMC7721中融合表达, 结果表明C17orf25蛋白可能定位在线粒体中, 侧面印证了在细胞内与NUDT9作用的空间可能性. ADP-核糖在体内具有重要的生理作用, 在细胞内的累积对细胞生长不利; 同时, ADP-核糖化是一种重要的蛋白质修饰方式, 与多种细胞凋亡的发生有关. 因此从实验结果可以判断, C17orf25对细胞生长的抑制作用可能通过与NUDT9的相互作用来实现.
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