换一批
换一批蜡样芽胞杆菌蛋白酶的克隆及在枯草芽胞杆菌系统中的高效表达
Cloning and over-expression of protease gene from Bacillus cereus WQ9-2 in Bacillus subtilis
摘要基于来源于Bacillus cereus WQ92的耐有机溶剂蛋白酶WQ的液相色谱双质谱（ LC MS MS）分析结果，设计引物，克隆耐有机溶剂蛋白酶WQ的基因，测序分析表明该蛋白酶的开放阅读框（ ORF）大小为1701 bp，编码566个氨基酸，其中含有信号肽（28个氨基酸）、前肽（220个氨基酸）及成熟肽序列（含954 bp编码318个氨基酸），相对分子质量约为3?7×104。将不带自身信号肽的蛋白酶基因aprWQ插入穿梭质粒pMA5中，构建了表达载体pMA5／aprWQ。该表达载体导入枯草芽胞杆菌WB600中获得阳性重组子WB600 pMA5／aprWQ，通过优化培养基成分以及培养条件，重组子发酵产蛋白酶体积酶活达到17400 U／mL，约为高产野生菌产酶量的5倍。重组蛋白酶在多种有机溶剂（体积分数为50％）中表现出了良好的耐受性，验证了重组菌表达的蛋白酶与来源于B?cereus WQ92的耐有机溶剂蛋白酶性质一致，该耐有机溶剂蛋白酶的高效表达为进一步发挥其高效生物催化作用等实际应用奠定了基础。
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关键词
耐有机溶剂蛋白酶枯草芽胞杆菌高表达发酵优化solvent-stable proteaseBacillus subtilisover-expressionfermentation optimization
分类号
Q786
栏目名称
研究与开发
DOI
10.3969/j.issn.1672-3678.2015.03.004
发布时间
2015-07-08
基金项目
国家高技术研究发展计划(863计划)重大项目(2012AA022205)
国家重点基础研究发展计划(973计划)
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