换一批摘要L-苹果酸是一种重要的四碳二羧酸,以可再生生物质为原料,通过微生物发酵高效制备L-苹果酸具有重要意义.本研究首先考察了氮限制条件、温度和pH对有氧条件下L-苹果酸合成的影响,结果表明氮限制条件是苹果酸大量积累的重要条件,最适的温度为35℃,最优pH为6.8.进一步分析辅因子水平及呼吸链相关基因的转录水平变化后发现,苹果酸的溢出可能是由于电子呼吸链效率下降,导致NADH的氧化不足,NAD+供给不足最终无法催化苹果酸进一步转化为草酰乙酸.通过敲除大肠杆菌中呼吸链NADH脱氢酶Ⅱ编码基因ndh,可降低电子呼吸链效率.最终重组菌E.coli AFP111(Δndh)在氮源充足条件下,丁二酸也能被大量代谢并以苹果酸为主要产物,收率达到 0.65 g/g.本研究成果将为通过呼吸链改造提高中间代谢产物的积累提供理论支持和借鉴.
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关键词
L-苹果酸溢出代谢辅因子NADH脱氢酶电子呼吸链L-malic acidoverflowmetabolismcofactorNADH dehydrogenaserespiratory chain
分类号
Q814（酶工程）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1672-3678.2024.04.004
发布时间
2024-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（22178175）
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