换一批高活性地龙蚓激酶粗酶液制备工艺优选与分析
Optimization of the preparation process for crude lumbrokinase solutions from earthworms
摘要在工业生产中,地龙蚓激酶的原料处理方法对最终蚓激酶的质量和活性有很大影响,但缺乏具体的研究数据.本文研究了粗酶液的制备方法,以期为地龙蚓激酶生产工艺优化提供参考.分别采用浸泡匀浆、去上清匀浆、浸泡上清和打粉浸泡4种方法从干地龙中制备蚓激酶粗酶液,通过考马斯亮蓝法测定蛋白含量,纤维蛋白平板法检测酶活力,SDS-PAGE电泳法和凝胶过滤色谱法探究粗品不同分子量蛋白分布.结果表明:浸泡上清法制得的粗酶液比酶活较高,可达18 233 U/mg;打粉浸泡法制得的粗酶液总酶活较高,每克干品所得蚓激酶总酶活为693593 U,电泳显示2个浸泡组所得蛋白分子量集中于(2.5～3.5)×104.浸泡匀浆法和去上清匀浆法制得的粗酶液总酶活和比酶活均较低,所得总蛋白中小分子量蛋白(＜1.0×104)的含量较高.凝胶过滤色谱图显示,浸泡上清和打粉浸泡组的蛋白活性峰的峰面积大于2个匀浆组.此外,温度稳定性实验表明,匀浆法所得蚓激酶更容易高温失活.获得高比酶活粗酶的制备方法是浸泡上清法,适用于进一步的分离纯化;粗酶得率较高的制备方法是打粉浸泡法,适用于工业生产;匀浆提取操作显著降低了干地龙蚓激酶活性.
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关键词
地龙匀浆蚓激酶纤维蛋白平板法凝胶过滤蛋白电泳earthwormhomogenizationlumbrokinasefibrin plate methodgel filtrationprotein electrophoresis
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1672-3678.2025.03.003
发布时间
2025-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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