换一批皱褶假丝酵母LIP1脂肪酶的异源表达及其在(S)2-异丙基-2-苄氧基丙二酸单乙酯合成中的应用
Heterologous expression of Candida rugosa lipase LIP1 and its synthetic application for monoethyl(S)-2-isopropyl-2-benzyloxymalonate
摘要手性2-异丙基-2-苄氧基丙二酸单乙酯(IBME)是手性药物的重要手性合成子.笔者筛选到一个具有不对称水解2-异丙基-2-苄氧基丙二酸双乙酯(IBDE)为(S)-2-异丙基-2-苄氧基丙二酸单乙酯((S)-IBME)活性的皱褶假丝酵母脂肪酶(CRL),该商品酶由皱褶假丝酵母表达,是一组包含7个高度同源脂肪酶LIP1～LIP7的混合酶,LIP1是其主要成分.为了高效获得LIP1脂肪酶以及提高LIP1脂肪酶对IBDE的对映选择性,拟用大肠杆菌对LIP1进行异源表达,首先克隆了LIP1基因,然后构建不同宿主、不同载体的重组大肠杆菌,并对诱导表达条件进行优化,最后在最适条件下进行催化反应.结果发现:使用构建的LIP1-pET-22b(+)-BL21(DE3)重组菌,在IPTG诱导剂浓度为200 μmol/L、诱导温度为20 ℃、诱导时间为16 h的条件下,蛋白表达量最高可达86.4 mg/L.在最适条件下,该酶催化IBDE产生(S)-IBME的酶活为184.28 U/mg,Km值为254.2 μmol/L,Vmax达到2.178μmol/(L·min),转化率为50％,对映体过量值(e.e.)由原来的95.3％提高至99.9％.可见,生物酶法制备手性药物关键中间体具有良好的应用前景.
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关键词
皱褶假丝酵母脂肪酶大肠杆菌异源表达酶法制备手性药物合成Candida rugosa lipaseEscherichia coliheterologous expressionenzymatic preparationchiral pharmaceutical synthesis
分类号
Q814.9（酶工程）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1672-3678.2025.04.003
发布时间
2025-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（2019G010129）
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