换一批人乳头瘤病毒16型(新疆株)E7基因的克隆与突变研究
Cloning and Mutation of Human Papillomavirus Type 16(Xinjiang strain)E7 Gene
摘要目的:克隆分析人乳头瘤病毒16型(HPV16)新疆株的E7基因;并对E7基因进行突变改造,以比较野生型与突变型HPV16E7基因的功能.方法:根据从中国新疆维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取的DNA,进行PCR扩增获得HPV16E7基因,然后分别将其克隆到pMD18-T载体上进行DNA序列分析.根据HPV16E7基因的特点,分别设计点突变引物,用PCR的方法进行HPV16E7基因的点突变.结果:PCR检测显示扩增出HPV16(新疆株)E7基因;测序结果表明HPV16-XJ 的E7基因全长297 bp,与德国标准株一致;利用设计突变位点的引物经PCR扩增,经序列测定后,分别得到了第70、172、271位碱基突变的HPV16E7基因;分别构建了野生型与单、双、三点突变的重组质粒pMD18-T-HPV16E7.结论:人乳头瘤病毒16型(新疆株)E7基因结构与德国标准株相同.HPV16E7基因多点突变的改造,为探索HPV16E7基因功能的变化和开展疫苗研究奠定了理论基础.
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