换一批一种新的非病毒基因转移载体及其体外细胞转染活性研究
Study on A Novel Non- viral Vector for DNA Delivery and Its Transfection Activity in the Cultured Cell
摘要目的:用低分子量的聚乙亚胺(PEI)有效地进行基因转染,为基因转染在基因治疗中的应用提供一种可靠、廉价、高效的方法.方法:将带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的真核表达质粒与阳离子聚合物聚乙亚胺(PEI)结合,用肝癌细胞系SMMC7721实验,研究PEI分子量与转染活性以及可能引起的细胞毒性之间的关系;进一步研究在血清存在的情况下,PEG(聚乙二醇8000)、叶酸等物质对PEI介导的转染效率的影响.结果:分子量为600Da的PEI在pH值为6.0时与质粒DNA以1:1的质量比混合,细胞转染效率最高为43.6+/-7.3%,随着分子量的增大,转染活性略有下降;进一步研究发现,在血清存在下,20μM的叶酸和15%的PEG能有效地改善PEI介导的转染活性,使其转染活性提高了13%;用光学相差显微镜检测了PEI潜在的细胞毒性,结果发现分子量为600Da的PEI没有使细胞形态改变或死亡,但是随着分子量的增大,PEI潜在的细胞毒性也相应增大.结论:PEI是一种高效、有用的非病毒载体,能够在培养的哺乳动物细胞中进行基因转移,这对疾病的基因治疗具有潜在的应用价值.
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