换一批海南龙血树DNA提取与ISSR反应体系的优化
Isolation Method for Genomic DNA and Optimization of ISSR Reaction Systems for Dracaena cambodiana Pierre ex Gagnep
摘要目的:从海南龙血树叶片巾提取出高质量的总DNA,建立与优化海南龙血树ISSR的反应体系.方法:采用4种DNA提取方法,提取海南龙血树叶片中的总DNA,并对DNA进行紫外和电泳检测.采用改良CTAB法提取了基因组DNA模板,对海南龙血树ISSR-PCR反应体系中各个主要影响因子进行了优化和筛选.结果:改良CTAB法提取的DNA A260/A260在1.7～1.9之间,纯度高、杂质少、DNA完整性好.根据PCR产物的琼脂精凝胶检测结果,由试验得到的最佳反应体系为:60ng模板DNA,1.5mmol/L Mg2+,0.25mmol/L dNTPs,1.0μmol/L引物,1U Taq酶,总体积为20μl.结论:改良CTAB法可以从海南龙血树叶片中提取高质最DNA,该反应体系适用于应用ISSR标记开展海南龙血树DNA指纹、遗传多样性等研究.
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