换一批
换一批红曲霉丙酮酸脱羧酶基因克隆及酶学性质分析
Enzymatic Characterization of Recombinant Pyruvate Decarboxylase from Monascus anka CICC 5031
摘要目的:研究生物乙醇发酵关键酶丙酮酸脱羧酶(Pyruvate decarboxylase,PDC)的性质和功能.方法:从SMART技术构建的红曲霉(Monascus anka CICC 5031 )cDNA文库中筛选pdc基因,亚克隆到表达载体pET-21b(+),原核表达、亲和层析纯化重组PDC.分析重组PDC和野生型PDC的酶学性质.结果:pdc基因的开放阅读框长1 713bp,编码一个570个氨基酸残基的蛋白质.重组PDC在E.coli BL21( DE3)中的表达量为菌体总蛋白的32.7％.重组PDC与野生型PDC比活分别为20.2U/mg和30.1U/mg.二者的最适反应条件均为pH6.0、30℃.重组PDC和野生型PDC的Km值分别为2.6mmol/L和0.56mmol/L.结论:红曲霉pdc基因可在大肠杆菌中高效表达,重组PDC稳定性较好,可用作生物乙醇生产的候选资源.
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