换一批大肠杆菌yfiF基因原核表达系统构建、表达条件优化及蛋白纯化
Construction of the prokaryotic expression system of yfiF gene in E.coli, optimization of its induced expression condition and purification of the protein
摘要[目的]构建大肠杆菌功能未知基因yfiF的原核表达系统,对诱导表达条件进行优化,并纯化表达的可溶性YfiF融合蛋白.[方法]使用pET16b表达质粒构建pET16b-yfiF原核表达载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达YfiF融合蛋白,对IPTG加入时机、终浓度及诱导时间进行优化,并使用镍柱纯化裂菌上清液中的可溶性YfiF融合蛋白.[结果]构建了pET16b-yfiF重组质粒,IPTG诱导表达YfiF融合蛋白,最佳诱导条件为细菌生长至OD600值为1时加入IPTG,终浓度为0.1 mmol/L,诱导9h.裂菌上清液中的可溶性YfiF融合蛋白纯化后浓度为209 μg/ml.[结论]成功构建了yfiF的原核表达系统,优化了诱导表达条件,可溶性YfiF融合蛋白得到纯化.
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