换一批FBXO473'-UTR双荧光素酶报告载体构建及与miR-33b-5p靶向验证
Construction of the FBXO47 3'-UTR dual luciferase reporter vector and validation of the targeted relation with miR-33b-5p
摘要[目的]构建FBXO47基因3'-UTR双荧光素酶报告载体,并验证miR-33b-5p与FBXO47的靶向关系.[方法]采用生物信息学软件预测miR-33b-5p与FBXO47结合位点;利用PCR扩增FBXO47基因3'-UTR序列,将其克隆到GV272载体中,构建FBXO47野生型及突变型双荧光素酶报告质粒;将miR-33b-5p或阴性对照分别与野生型GV272-FBXO47-wt3'-UTR或突变型GV272-FBXO47-mut 3'-UTR双荧光素酶报告质粒共转染至293T细胞中,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性.[结果]酶切及测序结果表明,野生型GV272-FBXO47-wt 3'-UTR及突变型GV272-FBXO47-mut 3'-UTR双荧光素酶报告载体构建成功;荧光素酶活性结果表明,相较于对照组,miR-33b-5p可使野生型GV272-FBXO47-wt3'-UTR的荧光素酶活性降低66％左右;而定点突变GV272-FBXO47-mut 3'-UTR的荧光素酶荧光素酶活性没有显著变化.[结论]成功构建了FBXO47基因3'-UTR的荧光素酶报告基因载体,miR-33b-5p与FBXO47存在靶向性.
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分类号
R735.2（消化系肿瘤）
栏目名称
DOI
10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.01.0003
发布时间
2018-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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