换一批卡他莫拉菌实时荧光PCR检测方法的建立
Establishment of real-time fluorescence PCR for detection of Moraxella catarrhalis
摘要[目的]建立基于SYBR Green Ⅰ染料法的卡他莫拉菌实时荧光PCR检测方法.[方法]选取卡他莫拉菌两个的基因(uspA1和copB)设计特异性引物;提取卡他莫拉菌、嗜肺军团菌等11种呼吸道病原体的DNA,通过常规PCR和实时荧光PCR对引物的特异性进行验证;以卡他莫拉菌DNA为模板进行实时荧光PCR,获取扩增曲线、标准曲线、熔解曲线和熔解峰图,并判断检测方法的灵敏度;进行重复性试验,评估检测方法的组内和组间重复性;通过模拟临床样本,对检测方法的灵敏度进行验证.[结果]共设计出3对引物,对嗜肺军团菌等10种呼吸道病原体具有特异性;对卡他莫拉菌的最低检出浓度为1.0×103cfu/mL;组内和组间最大变异系数分别为1.78％、1.89％;模拟的临床试验结果与预期相符.[结论]成功建立了卡他莫拉菌的实时荧光PCR检测方法,与10种常见的呼吸道病原体无交叉反应,且重复性变异系数小于2％,模拟临床试验灵敏度结果达到1.0×103cfu/mL.
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