过表达HAC1提高葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中分泌表达

Overexpression of HAC1 enhances the expression of glucose oxidase in Pichia pastoris

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摘要[目的]旨在提高重组葡萄糖氧化酶(GOD)在毕赤酵母中的表达.[方法]将构建的表达载体pPICZB-HAC1、pPICZB-Hrd1、pPIC3.5K-Ubc1线性化后,电击转化青霉葡萄糖氧化酶毕赤酵母感受态细胞,用含有50 μg/mL Zeocin或200 μg/mL G418的YPD平板筛选阳性转化子.阳性转化子进行试管诱导培养,筛选得到1株高产重组菌;在此基础上进行10 L发酵罐培养时,外源添加氯化血红素来提高葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达量.[结果]在试管水平筛选过表达转录激活因子HAC1、下游分子伴侣Hrd1和Ubc1的重组菌株,相比出发菌株酶活分别提高了 56.46％、43.51％和48.02％,其中过表达HAC1重组青霉葡萄糖氧化酶菌株在10 L发酵罐酶活达到1 308 U/mL.[结论]通过过表达HAC1或者分子伴侣可以辅助蛋白正确折叠,其中过表达HAC1菌株表达的葡萄糖氧化酶酶活最高,将酶活提高了 86％.

作者王庆庆 ^[1] 高庆华 ^[1] 罗同阳 ^[1] 董聪 ^[1] 王玥 ^[1] 刘小娜 ^[1] 唐兆宏 ^[2] 贾振华 ^[3] 学术成果认领

作者单位河北省微生物研究所有限公司,河北保定 071051 ^[1] 河北省微生物研究所有限公司,河北保定 071051;保定鲜尔康生物工程有限责任公司,河北保定 071051 ^[2] 河北省微生物研究所有限公司,河北保定 071051;河北省科学院生物研究所,河北石家庄 050051 ^[3]