换一批Klenow(exo-)蛋白的制备及其在RAA检测体系中的应用研究
Preparation of Klenow ( exo-) Protein and its Preliminary Application in RAA Detection System
摘要为了建立一种Klenow(exo-)蛋白的制备方法,并对其在RAA(recombinase-aid amplification)技术中的应用进行初步研究,通过Overlap点突变法构建获得目的基因片段,并构建Klenow(exo-)蛋白表达载体进而转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株进行诱导表达.表达产物通过Ni-NTA螯合层析进行初步纯化,然后用Heparine柱层析进一步纯化,通过SDS-PAGE鉴定纯化产物,获得了纯度较高的目的蛋白.用纯化后的目的蛋白配制RAA反应体系,针对肉源实际样本设计突变位点进行检测.实验结果显示该体系具有较强的特异性,在模板基因序列3'端出现双碱基差异时不会进行有效扩增,相较于常规的PCR检测方式该体系能够实现双碱基差异位点的有效区分.该技术未来有望大规模应用于SNPs的检测.
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DOI
10.19586/j.2095-2341.2018.0120
发布时间
2019-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
北京市自然科学基金（6164042）
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