换一批低成本、可放大的SUMO/pelB融合表达硫酸软骨素酶B的制备工艺
A Low-cost and Scalable Preparation Process for SUMO/pelB Fusion Expression of Chondroitinase B
摘要硫酸软骨素酶B(chondroitinase B,ChSase B)是一种钙依赖型裂解酶,能够特异性降解硫酸软骨素B.通过构建pelB/SUMO/ChSase B串联融合表达系统,开发了一种高产量、高纯度、低成本且易于放大的酶制备工艺.通过信号肽pelB引导周质分泌和小分子泛素修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)标签增强可溶性表达,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了高效表达.采用国产新型亲和填料结合阴离子交换层析,建立了无重金属污染的纯化流程,最终获得高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)纯度95.4%、比活力374.87 U·mg-1、发酵液产量达到873.14 mg·L-1的冻干酶制剂.工艺放大试验证实,从5 L到30 L规模单位产量提升了35%,冻干粉在-20℃储存12个月活性保留率>90%.该工艺具有环境友好性和产业化潜力,为ChSase B的规模化生产提供了可靠的解决方案.
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关键词
硫酸软骨素酶B大肠杆菌小分子泛素样修饰蛋白亲和层析工艺放大chondroitinase BEscherichia coliSUMOaffinity chromatographyprocess scale-up
栏目名称
DOI
10.19586/j.2095-2341.2025.0049
发布时间
2025-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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