西方蜜蜂Cytochromec基因的分子特征、系统进化及时空表达谱
Molecular Characteristics,Phylogeny and Spatiotemporal Expression Profile of the Cytochrome c Gene in Apis mellifera
摘要研究聚焦西方蜜蜂(Apis mellifera)的细胞色素c基因(cytochrome c,CytC),解析其分子特征、系统进化及时空表达模式.通过PCR扩增CytC的编码序列(coding sequence,CDS)并进行Sanger测序比对;利用ProtParam、Porter5、SWISS-MODEL、STRING数据库等预测CytC蛋白的理化性质、结构域及磷酸化修饰位点并构建蛋白互作网络;采用MEGA软件对10个物种的CytC蛋白进行多序列比对与系统进化分析;通过RT-qPCR检测CytC在工蜂成虫7个组织、幼虫发育阶段和成蜂不同日龄的表达谱.结果表明,CytC的CDS全长327 bp,共编码108个氨基酸,分子量约为11 kD,等电点为9.50.CytC蛋白无信号肽与跨膜结构,含13个磷酸化位点;二级结构以无规则卷曲(48.15%)和α-螺旋(25.93%)为主.系统进化显示,西方蜜蜂与小蜜蜂和中华蜜蜂的CytC蛋白聚为一支,与熊蜂科物种的分化显著.时空表达谱表明,CytC基因在脑组织中表达最高,咽下腺中最低;CytC在卵期的表达量最高,且显著高于其他时期(P<0.05),在工蜂幼虫体内的表达水平总体表现为持续下降趋势;成蜂中,CytC表达量随成虫期日龄增加逐渐上升,在18日龄最高,在1日龄最低.综上,CytC是亲水性的胞内蛋白,具有保守的分子特征与功能,其可能在西方蜜蜂发育过程中发挥着重要作用.
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