换一批荧光定量RT-PCR检测血管内皮细胞PAI-1 mRNA方法的建立
Establishment of the Method for Detecting PAI-1 mRNA Expression in Endothelia Cells by Using Fluorescence Quantitative RT-PCR
摘要为了建立用荧光定量PCR检测人微血管内皮细胞纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)mRNA表达的方法.提取人微血管内皮细总RNA,经RT-PCR获得靶基因(PAI-1)及管家基因(β-actin)的PCR产物.纯化后,作为标准品梯度稀释,采用SYBR Green I定量PCR检测,建立标准曲线.方法学考核参数为特异性、线性范围、灵敏性和重复性.分析全反式维甲酸对内皮细胞表达PAI-1 mRNA的干预效果.这种定量方法特异性好,检测的灵敏度达103拷贝,线性范围为104～1010拷贝,循环阚值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(r2>0.990),批内变异≤4.93%,批间变异≤9.12%.全反式维甲酸能上调内皮细胞PAI-1 mRNA的表达,且呈剂量依赖性.因此,荧光定量RT-PCR检测血管内皮细胞PAI-1基因表达的方法有助于溶栓药物药理学的研究和新药筛选.
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