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首页 > 生物技术通报 > 洋葱伯克霍尔德氏菌HMW DNA的制备及酶切研究

洋葱伯克霍尔德氏菌HMW DNA的制备及酶切研究

Study of Preparation and Restriction Endonuclease of B.cepacia HMW DNA

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摘要高质量粘粒基因组文库构建的关键是HMW DNA的长度至少为粘粒载体容量的10倍,通常粘粒载体的容量为30～50 kb,因此提取的HMW DNA应不小于500 kb.HMW DNA在制备时不能受到任何物理的剪切力,以免DNA断裂和损伤.利用琼脂糖凝胶包埋制备的DNA胶块经裂解和纯化后发现其DNA长度远大于500 kb,明显优于商品化试剂盒提取和酚抽提法.用BamHⅠ、Sau3AⅠ、XbaⅠ和HindⅢ对DNA胶块进行不完全酶切研究表明,构建文库常用的Sau3AⅠ并不适合胶块内酶切反应,而BamHⅠ酶切B.cepacia HMW-DNA效果较好,产生的DNA片段集中在20～50 kb之间,完全适合粘粒基因组文库的构建,为B.cepacia大插入片段基因组文库的构建以及功能基因组的研究奠定了良好的理论基础.

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作者 王筱青 [1] 喻晓蔚 [1] 徐岩 [1] 顾玲 [2] 学术成果认领
作者单位 江南大学生物工程学院酿造微生物与应用酶学研究室,无锡,214122 [1] 江苏省疾病预防控制中心CDC急传科,南京,210000 [2]
关键词 高分子量DNA粘粒文库胶块脉冲场电泳
医学主题词 黏粒(Cosmids)研究(Research)洋葱(Onions)电泳(Electrophoresis)基因组文库(Genomic Library)
分类号 S6
栏目名称
研究报告
发布时间 2009-05-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家高技术研究发展计划（863计划）（2008AA10Z304）
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生物技术通报

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2009年3期

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