换一批真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG的构建及在HeLa细胞中的表达
Construction of Eukaryotic Expression Vector pcDNA3.1(-)+KG Containing Green Fluorescent Protein and Its Expression in HeLa Cell
摘要为了将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein ,GFP)引入细胞核内,采用两轮PCR方法从原先克隆在pcDNA3.1(-)+GFP载体中将GFP编码序列扩增出来并引入Kozak序列和核定位信号,使用常规酶切和连接方法将其重组至pUCm-T克隆载体中,再将目的片段重组至pcDNA3.1(-)中,对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定后,构建了带有Kozak序列和核定位信号的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG.真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG被转染试剂Superfect转染至HeLa细胞中,绿色荧光蛋白基因在HeLa细胞中得到表达而且在细胞核中观察到绿色荧光.该研究以绿色荧光蛋白为标记初步建立了活体观察真核细胞核动态变化的研究体系.
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关键词
Kozak序列核定位信号绿色荧光蛋白真核表达载体Kozak sequenceNuclear localization signalGreen fluorescent proteinEukaryotic expression vector
分类号
Q2（细胞生物学）
栏目名称
发布时间
2010-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30040031）
吉林师范大学博士科研启动基金（2004010）
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