换一批运用重叠延伸PCR技术构建在甘丙肽全长cDNA嵌入第二内含子的重构分子
Construction of Recombinant Molecule of Galanin Full Length cDNA Including the Second Intron by OE-PCR
摘要构建嵌入第二内含子的甘丙肽(Galanin,GAL)全长基因组cDNA的重构分子.通过RT-PCR扩增出cDNA编区的序列,分别从基因组中扩增出cDNA的5'和3'端部分非编码序列;使用重叠延伸PCR(overlap extention PCR,OE-PCR)方法将三个片段重叠获得全长cDNA序列;再将全长cDNA从第三外显子第15个碱基处分成两部分,分开的cDNA前半部分和后半部分以及第二内含子进行重叠延伸获得重构分子,含有第二内含子的甘丙肽(GAL)全长基因组cDNA;将重构分子连入pMDI9-T simple载体.电泳分析观察到清晰的重构分子片段;测序显示重构分子由所设计的序列组成,第二内含子插入的位置准确,且无移码.使用重叠延伸PCR能够成功在cDNA中插入内含子获得一段重构基因.
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