换一批改良逆转录环介导等温扩增检测技术快速实时检测H9亚型禽流感病毒
Rapid and Real-time Detection of H9 Subtype Avian Influenza Virus by Improved Reverse Transcriptase Loop-mediated Isothermal Amplification Assay
摘要利用改良逆转录环介导等温扩增( RT-LAMP)技术建立一种快速、灵敏的检测方法用于H9亚型禽流感病毒检测.根据H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守区序列中的8个区段设计6条特异性引物,在恒温条件下进行核酸扩增反应,并以琼脂糖凝胶电泳和目视检查绿色荧光两种方法对扩增结果进行判定.结果表明,RT-LAMP的最小检测限为100fg,灵敏度比PTPCR高100倍,且与H5亚型、H7亚型禽流感病毒,新城疫病毒(NDV)无交叉反应.目视检查绿色荧光与常规琼脂糖凝胶电泳的判定结果一致.整个扩增检测过程在35 min内即可完成.利用临床样本对RT-LAMP法进行验证,结果与RT-PCR一致.由实时浊度分析得到的标准曲线,计算出临床样本中的病毒质粒拷贝数均在2×107-2×104之间.因此,本研究建立的RT-LAMP方法快速、灵敏、特异性强,是H9亚型禽流感病毒的一种高效检测方法.
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主题词
蛋白质亚型(Protein Isoforms)病毒(Viruses)禽流感(Influenza in Birds)方法(Methods)敏感性与特异性(Sensitivity and Specificity)
分类号
Q-0
栏目名称
发布时间
2012-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国际科技合作项目（2009DFA32720）；
"十一五"国家科技支撑计划（2009BAK61B04）
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