换一批斑点叉尾鮰NK-lysin基因的cDNA克隆及融合表达质粒构建
cDNA Cloning and Construction of Fusion Expression Plasmid for NK-lysin Gene from Channel Catfish ( Ictalurus punctatus )
摘要以斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)NK-lysin-type1的成熟肽为研究目标,首先通过RT-PCR和巢式PCR从斑点叉尾鲴的鳃中克隆到编码NK-lysin成熟肽的基因,该基因编码由92个氨基酸残基组成的成熟肽;6个高度保守的半胱氨酸残基位于成熟肽内,它们被推测与NK-lysin的抗菌活性有关.为了进一步构建原核表达系统用于成熟肽的表达,pET-32a(+)被选择作为融合表达质粒,该质粒含有1个trxA融合头基因,与目的片段mNK-lysin连接后形成融合基因trxA-mNK-lysin,进而有助于在工程菌E.coli BL21( DE3)中的可溶性融合表达.通过PCR、EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切处理以及DNA测序鉴定,证明pET-32a-mNK-lysin重组融合表达质粒已经被成功构建;将其转化至工程菌E.coli BL21( DE3)后的测序结果表明该重组质粒未发生任何DNA变异.
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