换一批
换一批摘要旨在建立一种简便检测线粒体DNA（mtDNA）核酸酶靶向剪切活性的方法。利用转基因技术，将一段含有两个靶向目标序列（T1、T2）的线粒体DNA序列随机整合到宿主基因组中，通过实时荧光定量PCR筛选单拷贝或低拷贝的单克隆转基因细胞株。将含有T1、T2的CRISPR（clustered regularly interspaced short palindromic repeats）/Cas9质粒分别瞬时转染到所选细胞株中，靶向剪切核基因组，在靶向目标序列处造成DNA双链断裂，引发非同源末端连接修复机制，引入插入或缺失突变。观察测序峰图，证明两个靶向目标序列T1、T2均有剪切效率，且T1高于T2。建立了一种高效快速检测线粒体核酸酶靶向剪切活性的新方法。
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关键词
线粒体核酸酶转基因细胞株靶向修饰CRISPR/Cas9实时荧光定量PCRmitochondria-targeted nucleasetransgenic cell linetargeted modificationCRISPR/Cas9real-time fluorescence quantitative PCR
栏目名称
技术与方法
DOI
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.12.012
发布时间
2016-03-11
基金项目
国家自然科学基金面上项目
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