换一批人IL-24基因原核表达载体的构建及蛋白的表达纯化
The Construction of Prokaryotic Expression Vector for Human Gene IL-24 and Expression and Purification of Its Protein
摘要构建人白细胞介素24(IL-24)原核表达载体并利用ELP-Intein系统表达纯化可溶性的IL-24蛋白.通过PCR扩增不合信号肽的人IL-24基因,将IL-24基因插入pET-ELP-Intein质粒构建重组表达载体pET-ELP-Intein-IL-24.将重组质粒转化至E.coliBLR(DE3),20℃下经IPTG诱导表达.利用ELP蛋白在不同温度下发生相变的特点和Intein蛋白的自切割反应纯化可溶性IL-24蛋白,将纯化得到的IL-24蛋白进行Western blot鉴定.用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测IL-24蛋白的生物学活性.成功构建了重组表达载体pET-ELP-Intein-IL-24,第一次通过原核表达方法表达并纯化出了可溶性的IL-24蛋白.Western blot检测显示目的蛋白能与IL-24抗体特异性结合,表明纯化出的蛋白确实为IL-24蛋白.细胞凋亡检测实验证明IL-24蛋白能显著地诱导hepG2细胞发生凋亡.
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关键词
白细胞介素24质粒构建原核表达蛋白纯化IL-24recombinant plasmid constructionprokaryotic expressionprotein purification
栏目名称
DOI
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.02.011
发布时间
2016-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
湖北省自然科学基金（2014CFB802）
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