换一批分子信标-TaqMan 探针法实时荧光定量 PCR 新型探针及引物
New Probe and Primer for Molecular Beacon-TaqMan Real Time Fluorescent Quantitative PCR
摘要在 TaqMan 探针法实时荧光定量 PCR 中，排除由引物探针聚合延伸引起的假阳性问题以及由引物二聚体（Primer Dimer，PD）引起的假阴性问题。首先对不同探针进行引物探针聚合实验；然后通过双重 PCR 的干扰实验选择合适的内标基因，并使用内标质粒检测验证中部同序引物排除 PD 干扰的实用性；最后比较探针法不同体系检测 HBV 基因的灵敏度。结果表明，引物与探针聚合实验中，含有反义碱基的 HBVP4在重复实验中未出现假阳性；竞争性双重 PCR 和非竞争性双重 PCR 两模板开始出现干扰作用的浓度差分别为20倍和100倍；对于内标基因，使用中部同序引物对以及普通引物对分别可以检测到10-9和10-8稀释度；3种 HBV 基因检测体系，使用普通引物对可以检测到 Ct33左右，加入内标系统和使用中部同序引物对均可检测到 Ct35左右。在TaqMan-分子信标结构调整的基础上引入反义碱基可以在排除由引物和探针聚合延伸引起的假阳性问题；在探针法中，使用中部同序引物对和加入内标系统均可降低 PD 的干扰程度，提升检测的灵敏度。
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关键词
实时荧光定量 PCRTaqMan 探针反义碱基引物二聚体内标系统real time fluorescent quantitative PCRTaqMan probeantisense baseprimer dimerinternal control
栏目名称
DOI
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.11.029
发布时间
2016-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重大科学仪器设备开发专项（2012YQ03026107）
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