换一批猪细小病毒1型VP2基因的原核表达及反应原性分析
Prokaryotic Expression of Gene VP2 of Porcine Parvovirus Type 1 and the Reactinogenicity Analysis of the Expressed Protein
摘要旨在研究猪细小病毒1型(PPV1)VP2蛋白(第155-439位氨基酸)的抗原性,为开发PPV1的检测方法奠定基础.以PPV1型AV31株的DNA为模板,扩增获得849 bp的目的片段,扩增产物克隆入pET30a(+)原核表达载体,构建pET30a-PPV1-VP2(155-439 aa)重组质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3);在37℃,以1 mmol/L IPTG诱导表达6 h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,并用不同浓度的尿素对纯化蛋白进行复性.SDS-PAGE分析表明,该VP2编码基因在大肠杆菌中得到表达,蛋白大小约为39 kD;Western blot检测结果表明,该重组蛋白与PPV1阳性血清发生特异性反应,与NA-PRRSV和PCV2阳性血清不发生交叉反应.该实验成功构建了PPV1-VP2(155-439 aa)原核表达载体,实现了在大肠杆菌中的表达,纯化后的复性蛋白具有较好的反应原性.
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关键词
猪细小病毒1型VP2基因原核表达反应原性porcine parvovirus type 1(PPV1)VP2 geneprokaryotic expressionreactinogenicity
栏目名称
DOI
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017.03.024
发布时间
2017-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家国际科技合作专项基金（2012DFG31890）
国家自然科学基金（31072143）
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