换一批人抗酶抑制因子-1的原核表达纯化及多克隆抗体的制备
Prokaryotic Expression,Purification and Polyclonal Antibody Preparation of Human Antizyme Inhibition Factor-1
摘要原核表达纯化人抗酶抑制因子-1((antizyme inhibition factor-1,AZIN1),制备并鉴定抗AZIN1多克隆抗体.pET-28a/AZIN1表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导蛋白表达,利用Ni-NTA树脂于变性条件下亲和层析纯化人AZIN1蛋白.将重组AZIN1蛋白用作抗原免疫BALB/c小鼠以制备多克隆抗体,ELISA检测抗AZIN1抗体效价,Western bloting、细胞免疫荧光、细胞免疫化学方法检测抗体的应用.结果显示,重组pET-28a/AZIN1表达质粒经酶切及测序鉴定构建正确.细菌内重组AZIN1蛋白可被IPTG诱导表达并以包涵体的形式存在.用亲和层析法能有效纯化原核表达的AZIN1蛋白,该蛋白在小鼠体内能够诱导抗AZIN1特异性抗体产生,血清效价达到1640000.制备抗体能够特异性识别和结合人及小鼠瘤细胞中表达的AZIN1蛋白,并可有效用于AZIN1的Western blotting、细胞免疫荧光和细胞免疫化学分析.成功原核表达和纯化了人AZIN1蛋白并制备了抗AZIN1多克隆抗体,为深入研究AZIN1在调控细胞增殖及在疾病防治中的作用提供了研究基础.
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栏目名称
DOI
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017.03.028
发布时间
2017-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81372265）
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