换一批摘要该研究旨为克隆、表达和纯化出人源DLL4蛋白,并制备出相对应的多克隆抗体.采用搭桥PCR,构建带有tPA信号肽的DLL4基因,并克隆到pGZX表达载体上,经过酶切和测序鉴定后,瞬时转染到HEK293F细胞中,转染48 h后对发酵上清液进行镍柱亲和纯化.利用Dot blotting、Western blotting和Fortebio大分子互作仪检测DLL4的生物活性;免疫兔子制备DLL4多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体效价,Western blotting检测抗体特异性.PCR扩增出1.6 kb的tPA-DLL4-6His目的片段,测序结果表明,与NCBI数据库中的DLL4序列(NM_019074.3)相同.一步亲和纯化后,得到纯度为95％的DLL4蛋白,Dot blotting和Western blotting检测到发酵上清液中含有DLL4蛋白,DLL4蛋白和DLL4抗体之间的亲和力在1.848E-10,R2=0.999,ELISA法获得DDL4抗体效价为1∶12 800,Western blotting检测DLL4抗体具有良好的特异性.成功制备出具有免疫原性的DLL4蛋白及其多克隆抗体.
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DOI
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0376
发布时间
2018-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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