换一批融合蛋白基因与抗体基因电转染CHO-S细胞的条件摸索优化
Optimization of Electrotransfection Conditions of Genes for Fusion Protein and Antibody to CHO-S Cells
摘要旨在对编码融合蛋白和抗体的重组质粒转染CHO-S细胞的转染条件进行摸索优化,提高外源基因的转染效率,从而增加外源蛋白的表达.应用Amaxa Nucleofector-Ⅱ 电转仪,从电转染程序、质粒用量及细胞用量三方面着手,最终发现编码融合蛋白的重组质粒的最佳电转条件为:电转程序U-030,质粒用量20μg/孔,细胞用量1×107个/孔;编码抗体的重组质粒的最佳电转条件为:电转程序U-024,质粒用量15μg/孔,细胞用量1×107个/孔;实验结果进一步显示抗体重组质粒电转染CHO-S细胞的效果要优于融合蛋白重组质粒,利用高通量细胞筛选仪Clone Pix对转染后重组细胞的阳性克隆数进行统计,证实了该抗体重组质粒的转染效率更高.这为以后的抗体及融合蛋白重组质粒电转染CHO-S细胞提供了一定的数据支持,同时提示不同类型的细胞及外源基因,都需要设计相应的电转染实验进行条件优化,进而为获得高产稳定的生产用细胞株奠定基础.
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DOI
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0700
发布时间
2019-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
“十三五”重大新药创制科技重大专项（2018ZX09733001-001-005）
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