换一批Ensifer meliloti 1021烟酰胺酶的酶学特性及3-氰基吡啶调控机理的研究
Research on the NAMase of Ensifer meliloti 1021 and Regulation Mechanism of 3-Cyanopyridine
摘要克隆和异源表达固氮菌Ensifer meliloti 1021烟酰胺酶(NAMase),研究其酶学特性,并探究3-氰基吡啶(3-CP)对该酶的调控机制.PCR扩增获得E.meliloti 1021烟酰胺酶基因(nam)序列,构建含nam的重组质粒并导入Escherichia coli Rosetta(DE3)中异源表达,用Ni-NTA亲和层析纯化蛋白,探究温度、pH、有机溶剂及金属离子对NAMase活性的影响,并对烟酰胺酶进行了固定化研究.结果显示,克隆得到长636 bp的nam,编码的蛋白分子量为22.6 kD,等电点(PI)为5.5.NAMase的最适pH为7.0,在30-50℃温度范围内孵育2 h酶活维持在97.1％ 以上,最适温度在30-70℃.Ag2+和异戊醇对NAMase的活性抑制率最大.在E.meliloti 1021野生菌株及NAMase过表达菌株转化烟酰胺的过程中3-CP会抑制烟酸的产量,这种效应并非底物抑制作用.
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DOI
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0027
发布时间
2019-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31570104）
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