换一批伪狂犬病毒的gE蛋白胞外区真核表达以及单克隆抗体制备
Eukaryotic Expression of Extracellular Domain of Pseudorabies Virus gE Protein and Preparation of Monoclonal Antibodies
摘要旨在构建gE基因胞外区真核表达载体,在HEK293F细胞中表达并纯化得到稳定的可溶性蛋白,并通过杂交瘤筛选获得表达gE蛋白的特异性单克隆抗体.生物信息学方法分析gE基因序列,构建gE胞外区真核表达载体pcDNA3.4-gE-6×His和pcDNA3.4-gE-mFc,通过瞬时转染的方法在HEK293F细胞中进行表达并进一步纯化.通过Western blot和SDS-PAGE鉴定和比较gE-6×His和gE-mFc融合蛋白表达情况.利用伪狂犬灭活全病毒免疫小鼠,电融合获得杂交瘤融合细胞,通过gE-mFc蛋白和IFA筛选出稳定且特异性结合gE蛋白的阳性杂交瘤细胞株.结果表明,成功构建pcDNA3.4-gE-6×His和pcDNA3.4-gE-mFc表达载体,表达纯化得到gE-6×His和gE-mFc可溶性蛋白.比较发现gE-6×His蛋白表达量低,稳定性差.而gE-mFc蛋白表达量高,稳定性好,一次性纯化后纯度可达85％.进一步利用gE-mFc筛选获得9株稳定性和特异性高的阳性杂交瘤细胞株.首次利用哺乳动物细胞表达系统表达并获得稳定的可溶性gE蛋白,并利用其筛选获得gE特异性单克隆杂交瘤细胞株.
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DOI
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0310
发布时间
2019-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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