换一批
换一批响应面法优化脯氨酸羟化酶转化反应工艺条件
Optimization of Catalytic Reaction Conditions for L-proline 4-Hydroxylase Using Response Surface Methodology
摘要通过优化脯氨酸羟化酶表达条件和转化反应条件,提高其转化反应效率.采用单因素法筛选脯氨酸羟化酶的最佳诱导温度、诱导剂浓度和转化反应条件,并采用响应面法预测影响转化反应各因素的最佳条件.结果显示,经过筛选和验证,蛋白表达最适诱导温度为28℃,IPTG浓度为0.2 mmol/L;转化反应最佳条件为:120 mmol/L 2-(N-吗啡啉)乙磺酸(pH 6.6)、1.5％Nonidet P-40、200 mmol/L L-脯氨酸、200 mmol/Lα-酮戊二酸,6 mmol/L L-抗坏血酸、6.0 mmol/L硫酸亚铁,最适反应温度为27℃,振荡速率为152 r/min.在最佳条件下,转化反应进行48 h后产物反式-4-羟基-L-脯氨酸的转化率可达100％,为合成反式-4-羟基-L-脯氨酸奠定了坚实的实验基础.
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