换一批
换一批应用CRISPR/Cas9技术敲除SERPINF2基因对牛病毒性腹泻病毒复制的影响
Effects of Knockout of Gene SERPINF2 via CRISPR/cas9 on the Replication of Bovine Viral Diarrhea Virus
摘要应用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除MDBK细胞的SERPINF2基因,以探明SERPINF2基因对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)复制的影响.采用CRISPR/Cas9技术建立SERPINF2敲除细胞;实时荧光定量PCR、免疫荧光染色、Reed-Muench法等检测BVDV感染SERPINF2敲除细胞后病毒RNA水平、dsRNA积累、病毒滴度和CPE等.构建SERPINF2基因敲除的MDBK细胞SERPINF2 KO,测序27株阳性克隆中有19株基因序列发生缺失(-)和插入(+)等移码突变,敲除效率约为70.37％;实时荧光定量PCR检测BVDV TC株感染MDBK细胞后SERPINF2 mRNA转录水平显著升高;与对照组Scramble细胞相比,BVDV TC株感染SERPINF2 KO细胞后病毒RNA水平和dsRNA积累显著性降低,CPE发生延迟,相同时间导致细胞脱落数量显著减少,BVDV滴度显著性降低.应用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功敲除MDBK细胞的SERPINF2基因,建立SERPINF2 KO细胞,试验表明敲除SERPINF2基因显著性抑制BVDV复制.
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栏目名称
技术与方法
DOI
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0886
发布时间
2021-06-23
基金项目
国家自然科学基金项目
新疆维吾尔自治区自然科学基金项目
新疆农业大学畜牧学博士后工作流动站
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