换一批陆地棉小GTP结合蛋白基因GhROP3的克隆、表达及VIGS载体的构建
Molecular Cloning,Expression and VIGS Construction of a Small GTP-binding Protein Gene GhROP3 in Gossypium hirsutum
摘要通过对陆地棉小GTP结合蛋白(small GTP-binding protein)基因GhROP3在不同逆境胁迫下的响应表达模式进行研究分析,为棉花抗逆相关基因克隆及棉花抗逆分子机制研究奠定基础.利用同源克隆的方法克隆GhROP3,利用生物信息学的方法分析该基因的理化性质,通过荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法分析GhROP3在不同逆境诱导条件下的表达模式及组织表达特异性.同时构建了该基因的VIGS沉默载体,并利用农杆菌介导法转化棉花,qRT-PCR检测沉默效率.结果表明,以陆地棉的cDNA为模板克隆得到GhROP3,其开放阅读框(ORF)为591 bp,编码一个含196个氨基酸的碱性亲水性蛋白,相对分子质量为21.75 kD.qRT-PCR分析结果表明,GhROP3在棉花幼苗根、茎、叶、子叶和下胚轴中均有表达,且在茎中表达水平最高;GhROP3对高盐、干旱、低温和棉花黄萎病菌处理都有一定程度的响应.构建该基因的VIGS沉默载体转化棉花,qRT-PCR检测GhROP3在棉花的叶片和根部沉默,证明VIGS沉默载体构建成功并可以在植物体内正常工作.GhROP3可能在陆地棉的抗逆境胁迫反应中发挥着重要的作用.
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