换一批小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法的建立
Establishment of Chemiluminescence Immunoassay for the Detection of Peste des Petits Ruminants Virus H Protein Antibodies
摘要本研究旨在建立小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的化学发光免疫分析检测方法.以H蛋白 4 个反应原性较好的B细胞表位串联后为检测抗原,在确定抗原包被量和血清稀释度,优化血清和酶标二抗反应时间的基础上,用ROC曲线分析确定检测临界值,建立了小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法,然后对该方法进行敏感性、特异性和重复性评价.结果显示,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法最佳抗原包被浓度为1.5×10-6 μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶100;血清及酶标二抗孵育时间均为 10 min,检测方法的临界值为S/P=9.77％,批内及批间变异系数均小于 10％;与口蹄疫、羊痘、蓝舌病及山羊传染性胸膜肺炎阳性血清不发生交叉反应;用建立的化学发光法和市售小反刍兽疫抗体cELISA试剂盒平行检测 247 份田间血清,两者相对符合率为 94.33％,但化学发光法敏感性更高.研究结果表明,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析方法灵敏、特异、稳定,可用于田间血清样品小反刍兽疫抗体检测.
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