换一批
换一批一种谷氨酸棒杆菌4-异丙基苯甲酸诱导型启动子的设计与应用
Design and Application of a Cumate-inducible Promoter for Corynebacterium glutamicum
摘要[目的]谷氨酸棒杆菌是一种重要的工业微生物,挖掘可调控性元件可有效拓展谷氨酸棒杆菌研究和应用的广度和深度.[方法]在谷氨酸棒杆菌组成型强启动子PH10 上嵌入阻遏蛋白CymR结合的操纵序列CuO,构建了 4-异丙基苯甲酸(Cumate)为诱导剂的启动子PH10-CuO.[结果]绿色荧光蛋白作为报告基因的实验结果显示,无诱导剂时,谷氨酸棒杆菌工程菌相对荧光强度较低;以 25 μg/mL 4-异丙基苯甲酸诱导 12 h时,谷氨酸棒杆菌工程菌荧光强度达 62 000,证明PH10-CuO具有很好的严谨性和诱导表达强度.构建了以启动子PH10-CuO调控recET和Cas12a表达的谷氨酸棒杆菌基因编辑质粒,实现谷氨酸棒杆菌染色体上靶标基因的精准编辑和外源基因插入.[结论]诱导型启动子PH10-CuO具有表达强度高且渗漏表达低的特点,可用于谷氨酸棒杆菌中被其调控基因的时序性表达.
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关键词
谷氨酸棒杆菌诱导型启动子阻遏蛋白CymR4-异丙基苯甲酸Corynebacterium glutamicuminducible promoterrepressor protein CymR4-isopropylbenzoic acid
栏目名称
技术与方法
DOI
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2024-0174
发布时间
2024-08-12
基金项目
国家重点研发计划
国家自然科学基金
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