梨火疫病生防菌的筛选、鉴定及防效测定
Screening,Identification and Efficacy Determination of Biocontrol Bacteria against Pear Fire Blight
摘要[目的]梨火疫病是由解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovora)侵染引起的细菌性病害,对梨和苹果产业构成重大威胁.从山梨(Crataegus cuneata)以及新疆野苹果(Malus sieversii)的枝条内筛选出对E.amylovora具有较强拮抗作用的菌株,为E.amylovora的生物防治提供菌种资源.[方法]采用平板对峙法筛选对E.amylovora具有拮抗效果的菌株,结合生理生化反应、16S rDNA和rpoB基因测序对拮抗菌进行鉴定,确定其分类地位;通过甲醇抽提法获得拮抗菌KX1对E.amylovora具有抑制作用的体外抑菌物质;利用薄层层析(TLC)对活性成分进行分离;采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术对上清液中脂肽类物质进行鉴定;对菌株KX1的全基因组数据进行生物信息学分析,探究其次级代谢产物基因簇;对库尔勒香梨(Pyrus sinkiangensis Yü)离体叶片、枝条和幼果进行温室防效测定.[结果]分离得到7株对E.amylovora具有较强拮抗作用的菌株,其中KX1的拮抗效果最强,结合生理生化特性、16S rDNA以及rpoB基因序列分析,菌株KX1被鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis).菌株KX1的甲醇提取物中含有脂肽类物质,TLC及LC-MS分析表明脂肽类物质主要是表面活性素(surfactin).脂肽粗提物在不同温度、pH以及储存时间处理后均能保持抑菌活性.菌株KX1的基因组大小为4.1 Mb,GC含量为46.33%.antiSMASH预测到1个次级代谢产物基因簇与丰原素相关的基因簇同源性为80%.温室防效测定结果表明,接种菌株KX1后,库尔勒香梨的幼果、叶片及枝条在保护性试验中的病情指数均显著降低,其防效分别为100%、55.33%和70.65%,且保护性防效优于治疗性防效.[结论]贝莱斯芽胞杆菌KX1能有效抑制E.amylovora的活性,具有一定的生防潜力.
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