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Smads转录激活检测系统的建立

Construction of Smads Transcriptional Activation System

摘要目的:构建Smads转录激活检测系统,以研究Smad2、Smad3、Smad4的功能.方法:将Smad2/3/4编码序列以正确读码框与pRC-1ac载体中的Lac阻遏蛋白编码序列融合构建重组质粒,将重组质粒与受Lac操纵子调控的荧光素酶报告基因质粒共转染293T细胞,检测荧光素酶活性,其活性的强弱即代表转录活性的强弱.结果:Smad2和Smad3具有较强的依赖于TGF-β1的转录活性;Smad4全长没有检测到转录活性,但其SAD结构域有不依赖于TGF-β1的转录活性,MH2结构域有依赖于TGF-β1的转录活性.结论:构建的Smads转录激活检测系统能有效地用于Smad2、Smad3、Smad4功能的研究.

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