换一批
换一批摘要目的:在大肠杆菌中表达人胸腺肽β4(Tβ4)的融合蛋白,通过CDAP介导的化学切割将融合部分切除,获得人Tβ4.方法:分别以质粒pET-Tβ4和pET-L12为模板,扩增Tβ4和核糖体亚基蛋白L12的基因片段,再以这2段基因为模板进行重叠PCR,并在连接处引入一个半胱氨酸(Cys)密码子,将得到的融合蛋白Tβ4,-Cys-L12基因片段与pET-22b载体连接,构建表达质粒,将其与N-末端乙酰转移酶质粒共转化至大肠杆菌BL21(DE3)并共表达,获得N端乙酰化修饰的融合蛋白Tβ4-Cys-L12;利用CDAP氰基化Cys的巯基,于pH10.0条件下在Cys残基N端完成切割,分离纯化获得Tβ4.结果:质谱分析目的产物相对分子质量为4 962.70,与天然Tβ4一致,表明获得了Tβ4.结论:CDAP介导的化学法可以有效切割融合蛋白获得Tβ4,建立了一套Tβ4的生物制备方法.
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栏目名称
研究报告
DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2009.05.022
发布时间
2009-11-27
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